YY/T 1699-2020 組織工程醫療器械產品 殼聚糖

范圍
本標準規定了用于制備組織工程醫療器械產品的殼聚糖及其鹽的要求、試驗方法等。
本標準適用于制備組織工程醫療器械產品的殼聚糖及其鹽。

術語和定義
下列術語和定義適用于本文件。
殼聚糖  chitosan
由2-氨基-2-脫氧-D-吡喃葡萄糖(GlcN)和2-乙酰氨基-2-脫氧-D-吡喃葡萄糖(GlcNAc)通過β(1→4)連接而成的線性多糖。其結構式為:


脫乙酰度  degreeofdeacetylation
一個殼聚糖分子中葡萄糖胺單元(脫乙酰基的單元)的摩爾分數。

分類
按照是否與酸結合，可分為殼聚糖、殼聚糖鹽酸鹽、殼聚糖乙酸鹽、殼聚糖谷氨酸鹽和殼聚糖乳酸鹽。

動物源性材料要求
動物組織中提取制備的殼聚糖及其鹽應按照 YY/T 0771.1、YY/T 0771.2、YY/T 0771.3 的要求進行管理和控制。

要求
性狀
類白色或淡黃色粉末狀、絲狀或片狀的固體，無臭。
傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)
殼聚糖或殼聚糖鹽傅里葉變換紅外光譜應符合相應的特征峰，寬峰(b)數值偏差不大于150cm^-1，其他峰數值偏差不大于20cm^-1。殼聚糖或殼聚糖鹽典型的FT-IR頻率(cm^-1)如表1所示。


含量
以干燥品計算，殼聚糖或其鹽的含量應不小于85%。
脫乙酰度
應為標示值的90%~110%。
pH
殼聚糖檢測液的pH應為5.0~8.0；殼聚糖鹽檢測液的pH應為4.0~6.0。
動力黏度
在20°C時殼聚糖的動力黏度不得超過標示量的 80%~120%。
注: 以mPa·s或Pa·s為單位標明黏度。
重均分子量及相對分子質量分布
殼聚糖或其鹽重均分子量和相對分子質量分布(Mw/Mn)由制造商確定。
重金屬含量
重金屬含量(以Pb計)應不大于10μg/g(質量分數)。
蛋白質含量
殼聚糖蛋白質殘留量應不大于0.2%(質量分數)。
乙醇等有機溶劑殘余量
乙醇殘余量應不大于0.5%(質量分數)。
注: 如在加工過程中使用了除乙醇之外的其他有機溶劑，干燥失重應不大于10%(質量分數)。
熾灼殘渣
應不大于1.0%(質量分數)。
不溶物
應不大于0.5%(質量分數)。
砷鹽
不得過百萬分之一。
細菌內 毒素含量
每1.0mg殼聚糖或其鹽細菌內毒素含量應小于0.05EU。
注: 如果以非無菌的方式提供，則最終用戶需進行去除細菌內毒素的處理以達到細菌內毒素要求。
無菌試驗
應無菌。如果殼聚糖或其鹽以無菌方式提供，應進行該項目的檢測，并按照 GB 18278.1、GB 18279.1、GB18280.1 進行無菌工藝確認。如果采用環氧乙烷滅菌，還應按照 GB/T 16886.7 對其殘留量進行控制和檢測。
微生物限度
每克(g)供試品中需氧菌總數小于100CFU，霉菌和酵母菌菌落數小于20CFU，不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和大腸埃希菌。
注: 如果殼聚糖或其鹽以非無菌的方式提供，則進行該項目的檢測。
生物學性能
應按照 GB/T 16886.1 的要求對殼聚糖及其鹽進行生物學評價。

試驗方法
脫乙酰度
脫乙酰度可采用以下方法測定，但不限于以下方法，應符合"脫乙酰度"規定。
殼聚糖鹽樣品的制備
稱取約2g殼聚糖鹽，置燒杯中，加乙醇100mL，邊攪拌邊滴加10%*溶液，至pH大于8。過濾，用水洗滌沉淀物至洗出液呈中性，50°C干燥4h，再于105°C干燥至恒重，作為供試品。

脫乙酰度測定——酸堿滴定法
準確稱取在105°C下干燥至恒重的樣品0.2g~0.3g，置于250mL錐形瓶中，加入0.1mol/L的鹽酸滴定液30mL，在20°C~25°C下攪拌至溶解(可加入適量水稀釋)。加入甲基橙-苯胺藍(將0.1%的甲基橙水溶液和0.1%苯胺藍水溶液以1:2體積比混合)指示劑5滴~6滴，用*滴定液(0.1mol/L)滴至紅色褪去。按式(1)和式(2)計算。

式中:
p  ——樣品中氨基含量，%；
c₁ ——鹽酸滴定液的濃度，單位為摩爾每升(mol/L)；
V₁——鹽酸滴定液的體積，單位為毫升(mL)；
c₂ ——*滴定液的濃度，單位為摩爾每升(mol/L)；
V₂——*滴定液的體積，單位為毫升(mL)；
16——氨基的相對分子質量；
m ——樣品質量，單位為克(g)；
D.D——樣品的脫乙酰度，%；
203——N-乙酰氨基-D-葡萄糖結構單元相對分子質量；
42 ——乙酰基的相對分子質量。

脫乙酰度測定——雙突躍電位滴定法
準確稱取在105°C下干燥至恒重的樣品0.2g~0.3g，加入過量的0.1mol/L鹽酸滴定液，攪拌至溶解。然后在電位滴定裝置上用*滴定液滴定，*滴定液首先中和過量的HCl，pH出現急劇上升，即第一個突變，然后*滴定液再中和與殼聚糖的氨基結合的鹽酸，達到滴定等當點時，pH出現第二個突變，兩個突躍點消耗的*摩爾數相當于樣品中的氨基摩爾數。按式(3)計算。

式中:
D.D——樣品的脫乙酰度，%；
ΔV ——兩突躍點之間消耗的*滴定液體積之差，單位為毫升(mL)；
c_NaOH——*滴定液的濃度，單位為摩爾每升(mol/L)；
m ——樣品質量，單位為克(g)；
16——氨基的相對分子質量；
0.0994——理論氨基含量。
以方法"脫乙酰度測定——雙突躍電位滴定法"為仲裁方法。


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